Zdravím, prosím o objasnění principu pulse chase experimentu.

Pochopil jsem, že principem teto metody, sledující expresi genů v čase (resp projekce syntézy bílkovin), je využití značených a neznačených AMK, jakožto substrátů pro translaci. Tzn. v pulse fázi experimentu je do prostředí inkorporováno množství radioakt. značené AMK (např Cys, Met), radioaktivně značená AMK se začlení do peptidového řetězce. Načež je ve fázi chase experimentu do média přidána velká dávka stejné AMK, akorát teď již neznačené. Začne se inkorporovat neznačená AMK a tím je zaručen viditelný posun proteinů v čase.

Chápu to tedy správně, že se tento experiment pozoruje pod mikroskopem? Na přednáškách nám totiž říkali o souvislostech s imunoselekcí - navázání výsledného proteinu na protilátku - rekombinantní protilátku, po čemž následuje odstředění ... proteiny jsou v peletách ... pak audiografické zviditelnění značeného proteinu, kdy ve výsledku vidíme proteiny exprimované v době vložení.

Celé mě to tedy zmátlo. Myslel jsem si, že podstatou pulse chase experimentu je to, že sledujeme postup proteinu v čase in vivo. Nechápu asi hlavní podstatu věci, něco mi prostě uniká.

Děkuji moc!!